磁珠法核酸提取的提取速度快、操作簡單方便，被生物實驗室和醫(yī)學(xué)機構(gòu)廣泛使用。但是偶爾在核酸提取過程中會有核酸提取得率低的情況，這對于核酸檢測結(jié)果有很大的影響，出現(xiàn)這種情況的原因是什么呢？接下來慧慶小編就為大家介紹磁珠法核酸提取得率低的原因和解決辦法。

  磁珠法核酸提取得率低的原因和解決辦法

  

  1、裂解不充分

  
  原因：提取核酸時，需要使用裂解液讓細胞進行裂解，裂解后的細胞會釋放出核酸，但是由于樣本的類型復(fù)雜且多變，因此不同樣本的裂解難易程度也會有區(qū)別。如果裂解不充分，細胞釋放出來的核酸有限，即使生物磁珠的吸附能力很強，也很難有比較高的得率。
  
  解決辦法：針對裂解不充分問題，建議通過提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度的方式，來增加裂解液的裂解能力。這是由于胍鹽和表面活性劑能夠破壞蛋白的高級結(jié)構(gòu)，促進膜蛋白的變性，使得細胞膜破裂。
  

  2、結(jié)合能力不足

  
  原因：結(jié)合能力不足通常有兩方面的原因，一是由于生物磁珠的問題導(dǎo)致，比如采用的生物磁珠比表面積太小，功能基團比較少，從而導(dǎo)致磁珠的核酸吸附能力變?nèi)?；另外一個原因是結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力比較弱。
  
  解決辦法：如果是磁珠的問題導(dǎo)致，建議選擇比表面積大且功能基團多的生物磁珠，通常情況下磁珠的粒徑越小，比表面積越大，但是同時磁相應(yīng)也會偏弱，所以選擇磁珠需要根據(jù)實際的樣本情況來定。
  
  如果是結(jié)合緩沖液的問題，那么可以通過提高醇的比例來增強結(jié)合能力，同時，也要提高離液鹽（胍鹽、鈉鹽等）的濃度來促進核酸與磁珠的結(jié)合。
  

  3、洗脫不充分

  
  原因：有時候明明裂解結(jié)合液還有各種條件都已經(jīng)優(yōu)化得很好了，但是提取到的核酸得率依然不高，這種情況有可能是磁珠雖然與核酸結(jié)合了，但是洗脫不充分，與磁珠結(jié)合的核酸沒有被洗脫下來。
  
  解決辦法：這種情況建議進行二次洗脫增加產(chǎn)量或提高洗脫體積。
  
  除了以上三種因素以外，得率的高低還與樣本以及個體的差異有關(guān)，不同的樣品核酸含量差異也比較大。
  
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